一、准备工作

1）根据各药品规定的配制方法，配制各种单项溶液，用微孔滤膜（0.45μm）单向抽滤。纯化水系溶液用水膜过滤，有机溶剂（或混合溶剂）用油膜过滤。 

2）脱气：配好的流动相需要洗脱排气泡。方法：用超声波清洗器清洗排气泡，时间约10-20分钟。

二、开、关机

1）打开组织器（最上面模块）的电源开关，按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开EZChrom Elite化学工作站。

2）关机时，首先退出EZChrom Elite化学工作站，按与开机时相反的顺序关闭系统的其他部分。

三、冲洗、检查

1、冲洗溶剂瓶到泵之间的管路

目的是排出这一段管路里的气泡及可能的污染物。

1）逆时针旋转Drain Valve阀180度，打开该阀门（下面模块左侧圆形阀门），以Purge（冲洗）系统。

2）从“Control”下拉菜单中选择“Instrument Status”，点击“Pump”下的“Manual Set” 按钮，“Flow Rate”设置范围为0-5mL/min，冲洗流路一般为2-3mL/min，改变B溶剂的百分比例，可以选择使用的冲洗溶剂，可以单独使用A瓶溶剂（乙腈、甲醇）或B瓶溶剂（水），也可以使用A和B混合溶剂进行冲洗，点击OK，冲洗开始，冲洗时间一般5分钟左右，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。

3）冲洗完毕，点击“Turn Off”，弹出对话框，点击“OK”，停止流路冲洗。

4）顺时针旋转，关闭Drain Valve阀，完成冲洗程序。

2、冲洗自动进样器

清洗包括：注射器/柱塞杆（Syringe Purge/Plunger），洗涤槽排水口（Wash Port）。

1）从“Control”下拉菜单中选择“Instrument Status”，点击“Sampler”

2）点击“Syringe Purge/Plunger Wash”，输入范围在0-5000uL的清洗溶剂体积。该仪器自动进样器为100uL，清洗溶剂体积选择500uL，则柱塞杆运动5次，清洗5次。

3）点击“OK”，提示将进样六通阀上的5号位的密封螺丝去掉，或者安装一个活塞清洗器，点击“OK”，开始清洗柱塞杆。

4）点击“Flush Wash Port”，“Wash Port Wash Strokes”设定清洗次数，如3次，则柱塞杆运动3次。点击“Wash”，开始清洗。注意，此时六通阀上的5号位有溶剂流出。

3、冲洗泵

有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

1）从“Control”下拉菜单中选择“Instrument Status”，点击“Pump”，设定冲洗泵的溶剂、流速。

2）从“Control”下拉菜单中点击 “Preview Run”，图中显示泵A的压力变化曲线。

3）点击红色圆点图标（stop run），停止冲洗。

4）在“Pump”窗口里点击“Turn off”，或直接在L-2160U PUMP面板上按PUMP ON/OFF,停泵。

4、检查检测器基线

1）从“Control”下拉菜单中点击“Baseline Check”。 根据检测器指标 (在打开电源至少两小时以后测试)：Noise: 0.6×10-5AU or less；Drift: 1.0×10-4AU/h or less，设定监测时间和指标值（缺省为15min；Noise：50；Drift:5000）。Noise的单位为mAU，因此是0.006mAU。

2）点击“Submit”后，仪器先进入方法平衡，当窗口下方显示： ，表明基线监测在进行中。

3）在停止监测后，会弹出基线监测结果窗口。

四、调用或建立仪器运行方法 “Method”

1）如果调用已建好的方法，从“File”下拉菜单中选择“Method”，单击“Open”。 选择后缀名为met的方法文件，单击“Open”，完成方法的调用。在此方法基础上，可按照后面新建方法的步骤来修改各项设置。

2）如果需要新建一个方法，从“File”下拉菜单中选择“Method”，单击“Method” 右拉菜单中的“New”。在方法中，经常需要调整的测量方法部分：流动相比例、柱温、采集时间等。

单击“Aux Traces”菜单，使其命令前有“√”标志，来设定所需追踪记录的仪器参数（温度、环境温度、A泵的压力）。

单击“Baseline Check”菜单，设定基线测试的标准值。

单击“Trigger”菜单选择触发方式。对于本仪器，固定采用“External”方式。

仪器设置完成，点击“Control”下拉菜单中的“Download Method”，将设置的方法传送到LC仪器中。

方法设定完成后，从“File”下拉菜单中选择“Method”，单击“Method” 右拉菜单中的“Save As”，在“File Name”一栏输入方法的名称，然后点击“Save” 按钮，完成方法的存储。

五、进样分析

1）预进样（Preview Run），

选择“Control”下拉菜单中的“Preview Run”，自动进样器不取样，检测器采集流动相的信号。观察基线平稳后，点击图标 ，或从“Control”下拉菜单中的“Stop Run”，停止预进样。

2）单次进样（Single Run）

可在预进样进行的同时，选择“Control”下拉菜单中的“Single Run”，或点击图标  ，输入样品号（Sample ID）、选择方法（Method）、数据文件存储路径（Data path）、输入数据文件名（Data file）；输入样品瓶在自动进样器中的位置号（Vial）、进样体积（Injection volume），如果前面的预进样程序在进行中，则右上角为“Submit”，点击“Submit”，提交，“Single Run”进入排队状态，在“Preview Run”停止后，自动执行“Single Run”；如Preview Run已完成，则右上角为“Start”，点击“Start”，开始“Single Run”分析。

3）系列进样（Sequence Run）

当有任务正在执行时，不能在当前联机活动的窗口中进行系列的设置。此时，回到软件打开时的EZChrom Elite窗口，右键点击所选的检测器，在下拉菜单中点击“Open Offline”，打开脱机窗口，进行离线的序列设置。

从“File”下拉菜单中选择“Sequence”，单击“Sequence Wizard”。在“Data File Type”中选中“For acquisition”，则所编序列用于采样操作。

点击“Next”，选择Increment Number作为样品号（Sample ID）、数据文件存储路径（Data path）、输入数据文件名（Data file）；输入序列数（Number of unknown runs in sequence），每个序列重复的次数（Repetitions per run）。

点击“Next”，输入样品瓶在自动进样器中的位置号（First Vial）、进样体积（Autosampler injection volume）。

点击“Next”，在序列中设置校正样品，如无，直接点击“Finish”。作进一步修改设置，如在序列结束后关机，则在最后一行选择Run Type为“Shutdown”。 设置完成，存储后缀名为seq的序列文件。

4）调用系列

在联机窗口选择“Control”下拉菜单中的“Sequence Run”，或点击图标 ，选择已编好的系列进样方法，点击“Start”，开始进样分析。

5）传送系列

如上述的4）未能启动操作，则在联机窗口，点击“Control”下拉菜单中的“Download Tab”，将设置的序列方法传送到LC仪器中。

6）分析任务排队（Run Queue）

选择“Control”下拉菜单中的“Run Queue”，或点击图标 ，在下图里点击“Begin Run”右边的时钟图标，弹出“Schedule Run”对话框，选择该任务的执行时间。

7）同时显示多个窗口

选择“Window”下拉菜单中的“Tile Horizontally”，水平平铺当前打开的各个窗口

六、数据处理

1）显示谱图

脱机数据处理，点击“Open Offline”，点击“Login”，点击“OK”。从“File”下拉菜单中选择“Data”，点击“Open”，数据文件的后缀名为dat。

2）多个色谱图显示

在UV吸收图窗口点击鼠标右键，弹出菜单。

●Add Trace: 一次只选择一个色谱图，在当前色谱图上叠加另一个色谱图，用于两个色谱图的比较，如保留指数、峰面积的重现性比较。

操作：Add Trace → Open Data → 选择一个*.dat文件，Open → Apply。

●Add Multiple Traces : 一次可选择多个色谱图，在当前色谱图上叠加多个色谱图，用于多个色谱图的比较。

操作：Add Multiple Traces → Open Data → 左键双击*.dat文件，自动加入Data Files列表中→ Open

●Clear Overlays: 取消谱图叠加，回到当前色谱图。

操作：Clear Overlays → Yes

●Axis Setup: 设置UV吸收图坐标轴X和Y轴的显示尺寸

操作：Axis Setup → 设置 → OK

●Appearance: 设置在谱图的背景色、线的颜色、文字颜色。

●Full Unzoom: 恢复至全图。

3）查看数据的样品信息

为了便于日后查看数据，在测试时，应详细输入样品的信息，如名称、浓度、测试时间。*.dat文件的样品信息描述在Data →Properties→Description。直接在其中输入信息，点击OK后即保存。

4）积分

基本操作： File→Data→Open→*.dat→UV窗口→Analyze→显示积分和基线→用Integration Off选择不要显示积分的区域→Analyze Now→Integration Events。

注意事项

1）根据检品要求调“流速”，未明确“流速”的检品，调流速使柱压在适宜范围内（不得超过40MPa）。 

2）进样前基线要走平稳，且检测器已预热半个小时。

3）含盐的流动相的冲洗方法：每天操作结束后，先用纯化水或含甲醇5%（最高浓度在20%以下）的水冲洗时间约20～30分钟。再用高浓度甲醇（含甲醇85%以上）溶液冲洗，约30～60分钟（注：不能直接用有机溶剂冲洗，盐类易析出，堵塞色谱柱，造成色谱柱永久性损坏；所用水最好是重蒸馏的水。必须抽滤和脱气）。

不含盐的流动相的冲洗方法：每天操作结束后，先用流动相冲洗约10～15分钟，再用含5%甲醇的水冲洗10～20分钟。最后用高浓度甲醇（含甲醇85%以上）溶液或纯甲醇冲洗，时间约20～30分钟（注：不能直接用纯水冲洗，易造成流动停止。所用水最好是重蒸馏的水。必须抽滤和脱气）。

4）流动相或单项溶剂需经过0.45μm的微孔滤膜过滤（色谱纯的有机溶剂可以不用过滤），以降低色谱柱受污染的程度，延长使用寿命。抽滤流动相或单项溶剂时，应注意滤膜的选择：抽滤纯水或纯水溶液时，选用水系滤膜，抽滤分析纯有机溶剂或混合溶液中含有有机溶剂，要选用脂（F）滤膜。

5）若仪器长时间不用，可定期加电，使仪器预热一段时间，以免仪器内部件受潮。

6）在电压不稳定时，连续减压，应随时注意观察压力变化。

7）在通常情况下，真空泵运转工作时，调压旋钮应保持处于旋紧状态。减压运转只在特定情况下（如固相萃取操作）使用。

8）每次使用完毕后，首先清洁工作台面，将样品、各种玻璃器皿，资料等整理干净。

登记仪器使用情况！

（供稿者：张尧）