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日立Chromaster高效液相色谱仪操作规程

一、准备工作

1)色谱条件的选择:选择色谱柱、流动相、检测器。

2)流动相配制:采用“HPLC” 级溶剂,水采用纯化水。配制方法见相关质量标准,使用前用0.45μm有机系滤膜过滤。流动相进行超声波脱气(或真空脱气、氦脱气),脱气不少于15min,除去溶解的气体。然后将泵上末端带有吸滤头的输液管插到处理好的流动相贮液瓶中。

3)样品配制:要采用0.45μm或更小孔径滤膜过滤,装于样品瓶中,然后放于进样器的样品架上准备测定。


二、启动仪器

1)打开计算机,之后依次打开组织器电源开关,柱温箱电源开关,自动进样器电源开关。再按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开LC各模块电源开关。

2)双击桌面上Chromaster图标,启动软件。

3)点击“系统状态”按钮,点击“初始化” ,状态由 “待机”转为“连接中”,确认各模块的连接状态。

三、仪器准备


1)单击“模块的详细信息”按钮,选择“泵”按钮。

2)单击“净化”按钮,将所需净化的管路前面打“√”,送液2分钟后,单击“关闭净化”按钮。

3)若使用示差折光检测器,需要对检测器进行净化,通常需要30 min – 1 h,关闭检测器净化。

4)若仪器长时间没有使用,则需要对柱塞、注射器、清洗口等位置进行清洗。

四、建立方法文件 建立样品表

1) 在“文件”菜单中选择“新建” “方法” 。在“方法” 中,经常需要调整的测量方法部分:梯度模式、流动相比例、柱温、采集时间、定量计算方法等。点击“更新方法文件”按钮。完成方法设置,保存。

2)在“文件”菜单中选择“新建” “样品表” 。填入样品瓶放置位置的编号,进样体积,样品名称,方法名称等,完成对样品表的编辑,保存。

五、样品测定

点击“数据采集”按钮,弹出开始分析界面,仪器开始按照“方法”中设定的流动相和波长开始走基线,当基线平稳,压力稳定(通常在同一流动相平衡半小时以后)后,点击“单分析的开始”或“连续分析的开始”按照样品表编制的顺序测定样品。

六、数据的处理和报告的生成

1) 点击“数据处理”图标,选择记录的数据,双击或单击“显示”。选择合适的报告形式,可以让数据按要求呈现在我们面前,并且保存到常用的格式中去。

2)常用的两种报告形式:一种比较全面的报告(详细版);一种是简明报告(简明版)。这两种报告可以根据要求自己编辑。点击“打印”按钮,可以生产PDF文档,方便查阅。

七、关机

1)实验结束后,首先关闭检测器开关。

2)然后用90%的甲醇或乙腈(或按照色谱柱保存的溶剂为流动相)以1mL/min的流速冲洗色谱柱及管路30分钟。若流动相中有缓冲溶液,实验完毕后应先用纯水以1mL/min的流速冲洗色谱柱30分钟,再用90%的甲醇冲洗。

3)依次关闭柱温箱、自动进样器、泵、组织器、计算机的电源开关。

4)登记仪器使用情况,做好整理和清洁工作,并用塑料布将仪器盖好。

注意事项:

1)安装柱子注意3个阀要一一对应,1、2、3-----进柱子,1′、2′、3′-----出柱子。柱子安装完后将外面的黑色盖子一定要盖紧。

2)装流动相瓶子的盖子上面用封口膜封住,以免灰尘进去,也可防止流动相挥发。

3)柱压异常升高时,考虑在线过滤器堵塞,可将其拆下,超声清洗(可使用纯净水或者5%-10%硝酸溶液)。

4)柱压异常降低时,考虑系统漏液。

5)柱压不稳定时,考虑管路中有气泡或可能是入口单向阀、出口单向阀堵塞,可在专业人员指导下,拆下超声清洗。

6)输液管持续出现气泡时,考虑流动相滤头污染,可将其拆下,超声清洗(可使用纯净水或者5%-10%硝酸溶液)。 

7)当仪器报警,同时仪器屏幕显示【LEAK ERROR】时,考虑漏液传感器处有液体或灰尘存在,目视检查并小心擦拭。 、

8)若进行注射器清洗,需要打开六通阀的4号口白色塞子,然后点击清洗,清洗完成后拧上塞子。

9)仪器长时间不用时,柱子及管路内部应充满甲醇,如有特殊要求的柱子应按照购买时储存条件储存。

10)使用中注意流动相瓶中溶液情况,不要流尽,切忌使泵空转。 

11)在使用示差折光检测器时,不能使用梯度洗脱,且流动相在使用时需要预先混合。

(供稿者:张英、张尧)