一、准备工作

1）色谱条件的选择：选择色谱柱、流动相、检测器。

2）流动相配制：采用“HPLC” 级溶剂，水采用纯化水。配制方法见相关质量标准，使用前用0.45μm有机系滤膜过滤。流动相进行超声波脱气（或真空脱气、氦脱气），脱气不少于15min，除去溶解的气体。然后将泵上末端带有吸滤头的输液管插到处理好的流动相贮液瓶中。

3）样品配制：要采用0.45μm或更小孔径滤膜过滤，装于样品瓶中，然后放于进样器的样品架上准备测定。

二、启动仪器

1）打开计算机，之后依次打开组织器电源开关，柱温箱电源开关，自动进样器电源开关。再按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开LC各模块电源开关。

2）双击桌面上Chromaster图标，启动软件。

3）点击“系统状态”按钮，点击“初始化” ，状态由 “待机”转为“连接中”，确认各模块的连接状态。

三、仪器准备

1）单击“模块的详细信息”按钮，选择“泵”按钮。

2）单击“净化”按钮，将所需净化的管路前面打“√”，送液2分钟后，单击“关闭净化”按钮。

3）若使用示差折光检测器，需要对检测器进行净化，通常需要30 min – 1 h，关闭检测器净化。

4）若仪器长时间没有使用，则需要对柱塞、注射器、清洗口等位置进行清洗。

四、建立方法文件 建立样品表

1） 在“文件”菜单中选择“新建” “方法” 。在“方法” 中，经常需要调整的测量方法部分：梯度模式、流动相比例、柱温、采集时间、定量计算方法等。点击“更新方法文件”按钮。完成方法设置，保存。

2）在“文件”菜单中选择“新建” “样品表” 。填入样品瓶放置位置的编号，进样体积，样品名称，方法名称等，完成对样品表的编辑，保存。

五、样品测定

点击“数据采集”按钮，弹出开始分析界面，仪器开始按照“方法”中设定的流动相和波长开始走基线，当基线平稳，压力稳定（通常在同一流动相平衡半小时以后）后，点击“单分析的开始”或“连续分析的开始”按照样品表编制的顺序测定样品。

六、数据的处理和报告的生成

1） 点击“数据处理”图标，选择记录的数据，双击或单击“显示”。选择合适的报告形式，可以让数据按要求呈现在我们面前，并且保存到常用的格式中去。

2）常用的两种报告形式：一种比较全面的报告（详细版）；一种是简明报告（简明版）。这两种报告可以根据要求自己编辑。点击“打印”按钮，可以生产PDF文档，方便查阅。

七、关机

1）实验结束后，首先关闭检测器开关。

2）然后用90%的甲醇或乙腈（或按照色谱柱保存的溶剂为流动相）以1mL/min的流速冲洗色谱柱及管路30分钟。若流动相中有缓冲溶液，实验完毕后应先用纯水以1mL/min的流速冲洗色谱柱30分钟，再用90%的甲醇冲洗。

3）依次关闭柱温箱、自动进样器、泵、组织器、计算机的电源开关。

4）登记仪器使用情况，做好整理和清洁工作，并用塑料布将仪器盖好。

注意事项：

1）安装柱子注意3个阀要一一对应，1、2、3-----进柱子，1′、2′、3′-----出柱子。柱子安装完后将外面的黑色盖子一定要盖紧。

2）装流动相瓶子的盖子上面用封口膜封住，以免灰尘进去，也可防止流动相挥发。

3）柱压异常升高时，考虑在线过滤器堵塞，可将其拆下，超声清洗（可使用纯净水或者5%-10%硝酸溶液）。

4）柱压异常降低时，考虑系统漏液。

5）柱压不稳定时，考虑管路中有气泡或可能是入口单向阀、出口单向阀堵塞，可在专业人员指导下，拆下超声清洗。

6）输液管持续出现气泡时，考虑流动相滤头污染，可将其拆下，超声清洗（可使用纯净水或者5%-10%硝酸溶液）。 

7）当仪器报警，同时仪器屏幕显示【LEAK ERROR】时，考虑漏液传感器处有液体或灰尘存在，目视检查并小心擦拭。 、

8）若进行注射器清洗，需要打开六通阀的4号口白色塞子，然后点击清洗，清洗完成后拧上塞子。

9）仪器长时间不用时，柱子及管路内部应充满甲醇，如有特殊要求的柱子应按照购买时储存条件储存。

10）使用中注意流动相瓶中溶液情况，不要流尽，切忌使泵空转。 

11）在使用示差折光检测器时，不能使用梯度洗脱，且流动相在使用时需要预先混合。

（供稿者：张英、张尧）