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微芯片电泳仪MCE-202 MultiNA操作流程

一、准备工作

1)分析前准备:准备1000ml的Milli-Q清洗用水,确认废液瓶是空的,确认机械手原点位置。

2)分离缓冲液、ladder和染料准备:估测样品大小选择使用DNA500,DNA1000,DNA2500和RNA试剂盒,使用前将DNA500里的ladder用1×TE缓冲液稀释50倍,DNA1000,DNA2500里的ladder用1×TE缓冲液稀释100倍,RNA试剂盒中的ladder用RNA保存液稀释6 倍后备用。试剂盒中不包括荧光染料,建议采用:DNA 分析:SYBR® GOLD, RNA 分析:SYBR GREEN Ⅱ,用1×TE缓冲液稀释100倍,再用分离缓冲液稀释100倍后备用。

3)样品准备:DNA样品预混液2~10μL,RNA预混液3~15μL,盐含量DNA分析最大为10mM Tris中含有50mM KCl,1.5mM MgCl2,RNA样品最大不得超过10mM Tris 中含有1mM EDTA。

二、仪器准备

打开计算机,启动MultiNA仪器和控制软件,确认软件与计算机连接。 确认微芯片已放置到位,否则放置微芯片并登录。

三、放置缓冲液,内标ladder,样品。

每一种试剂盒的分离缓冲液和内标都有指定的放置位置。

四、产生样品数据表、 登陆分析序列表

1)点击“Sample Entry”下的“New”根据选择样品和选择使用的试剂盒选择标准分析的项目,如 DNA 500 _On-Chip,也可从“Sample sheet file”中选择之前保存的方法,点击“OK”。若想在同一个分析序列中追加另一个相同样品表,点击“add”。

2)输入样品名称,备注,更改类型。需要保存样品表,点击“Save”。

3)点击“Enter”,登录样品表,点击“Yes”。

五、样品测定

点击开始键开始分析。

六、数据分析

1)进入数据显示,分析画面,“View”下的“Data File”,可以看到电泳图,模拟凝胶图,浅绿色带选定狂对应为ladder,灰色对应样品,点击图上一个样品即可看到其数据,可通过“Reanalysis”对峰进行手动编辑。。

2)确认样品数据峰值表

点击“View”下的“Options”。

3)打印数据

选择需要打印凝胶图上的数据点击其选定框,可以打印相应的电泳图,凝胶图和分析结果。

4)保存数据

软件自动产生保存原始数据,分析数据和Ladder数据。

七、关机

实验结束后用用清洗用水至少冲洗3次,用色谱纯乙醇冲洗后关闭软件,仪器和计算机。

注意事项:开机后预先用清洗用水冲洗至少3次再开始分析。

1)分离缓冲液与染料稀释液混合应当在使用当天配制。

2)配制好的ladder和内标溶液尽量分装,避免反复冻融使用。

3)分离缓冲液中不能有气泡。

4)RNA样品分析,推荐在分析序列的开始设置为空分析,RNA储存液用于空分析。

5)不要接触微芯片盖板背面的电极引脚,否则可能影响与微芯片表面电极接触,造成不能正常施加电压。

(供稿者:易伶潞)