Shimadzu HPLC10AVP高效液相色谱仪的操作程序

液相色谱流程图及仪器组成:

1，2—贮液瓶 

3—在线脱气机：DGU-12A 

4，5—输液泵：LC-10ATVP（一般A为水相；B为有机相） 

6—自动进样器：SIL-10ADVP 

7—柱温箱：CTO-10ASVP 

8—检测器：RF-10AXL荧光检测器、SPD-10AVP紫外检测器 

9—系统控制器：SCL-10A 

10—计算机 

11—废液收集瓶

一、准备工作

1）色谱条件的选择：选择色谱柱、流动相、检测器 

2）准备流动相：采用“HPLC” 级溶剂，水采用纯化水。流动相进行超声波脱气（或真空脱气、氦脱气），脱气不少于15min，然后将泵上末端带有吸滤头的输液管插到处理好的流动相贮液瓶中。 

3） 样品过滤：要采用0.45um或更小孔径滤膜过滤，装于样品瓶中，然后放于进样器的样品架上准备测定。 4） 检查电路或管路是否连接好，接通电源。

二、启动仪器

1) 依次打开在线脱气机、泵系统、进样器、柱温箱、系统控制器。 

2) 开两泵排气旋钮小于900，按泵控制面板上的purge键，泵控制面板上屏幕显示“purge line”，此时流动相由排气管路流出，不经色谱柱。 

3) 排气结束，检查输液管中的气体是否排空，否则重复2步骤，待排尽后，关闭泵排气旋钮。 

4) 打开进样器门内的排气旋钮小于900，排尽管路中的空气，关闭旋钮。关好进样器的门。 

5) 打开电脑至CLASS-VP 控制软件界面 

6) 双击Instrument 1图标，开启工作站，若界面没有泵、柱温箱、检测器图标，可以点击Control项下LC Setup Assistant项，即可显示。

三、建立新方法

1）打开File下 Method菜单，点击new（点击open可打开原有方法文件） 

2）根据工作站提示及实验需要分别设定泵、自动进样器、柱温箱、系统控制器、检测器等的参数信息。 

单击屏幕泵图标，分别在Pumps、CTO-10ASVP 、RF-10AXL、SIL-10ADVP、Time Program项下设定Flow rate、Conc%、Temperature及Wavelenth等参数信息，或者分别单击图标进行设定。 

3）参数设好后点击File项下的Method Save As，将方法命名并保存。 

4）然后点击Download，下载方法。

四、样品测定

1) 点击instrument\pump\oven仪器控制按钮使之处于“ON”的状态。 

2) 泵开始运行冲洗仪器管路及色谱柱,同时可依次点击Purge Autosampler及Rinse Autosampler按钮，对自动进样器进行冲洗，整个过程进行30分钟左右。 

3) 开启检测器电源，点击软件界面中LCD按钮，检测器预热5分钟左右。 

4) 点击 图标走基线，基线平稳之后，才可以进样。（可点击 图标，使基线回零。） 

5) 点击 图标进样，进样前，出现Single Run Acquisition表格界面，在此填写指定样品名、方法文件名、保存数据的路径、保存数据的文件名，样品瓶号及采集样品的量等信息。然后点击Start，进样器开始采集样品并进样。 

6) 进样后，检测器同时开始采集记录数据，当到达Stoptime时，仪器自动停止测定并显示谱图 

7) 进样过程中，可点击 图标，提前中止进样及数据采集。

五、数据处理及打印

1)打开File的下拉菜单，找到Data项，点击Open，找到需要的数据文件，点击Open，可显示谱图。 

2）在谱图界面中点击鼠标右键，可对图谱进行复制、删除、调整等操作。还可根据需要，分别用工作站提示钮，如Integration 、Calibration等，进行谱图数据处理。 

3）打开Reports的下拉菜单，选择View项中所列出的报告形式，则屏幕显示所需要的当前数据文件的报告。 4）点击保存按钮，然后点击Save Report Template，并指定文件名以保存此文件。 

5）在报告文件界面中点击右键，可对报告文件进行打印预览及打印。

六、关机

1）实验完毕后，首先关闭检测器。 

2）然后用90%的甲醇或乙睛以1mL/min的流速冲洗色谱柱及管路30分钟。 

3）点击instrument\pump\oven仪器控制按钮使之处于“OFF”的状态,断停仪器的运行，关闭工作站软件。 

4）依次关闭柱温箱、进样器、控制仪、泵系统、在线脱气机、计算机的电源开关。 

5）登记仪器使用情况，做好整理和清洁工作，检查安全情况。

注意事项：

1) 流动相尽量采用“HPLC” 级溶剂，水采用纯化水，流动相最好进行脱气后再使用。 

2) 若流动相中有缓冲溶液，实验完毕后应先用水以1mL/min的流速冲洗色谱柱30分钟，再用90%的甲醇冲洗。 3) 样品溶液要保持清澈，无颗粒物，以免造成色谱柱堵塞。所以进样前要采用0.45um或更小孔径滤膜过滤。 4) 实验过程中确保流动相充足，切忌使泵空转。 

5）为尽量延长检测器灯的使用寿命，要注意尽量以“最后开最先关检测器”为原则。 

6）为保护色谱柱，要定期对色谱柱进行冲洗。 

7）需及时清除计算机中无用的谱图，保证计算机快速处理的需要。 

8）长时间无人用时，切断电源，将与泵连接的吸滤头从流动相中拔出，并将仪器罩好。